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            2014主管檢驗技師輔導(dǎo):總蛋白定量測定

            總蛋白定量測定是醫(yī)學(xué)檢驗主管技師考試需要了解的知識點,考試吧整理了相關(guān)內(nèi)容,希望對廣大復(fù)習(xí)備考的考生有所幫助。

              1、原理

              磺基水楊酸為生物堿試劑,能沉淀蛋白質(zhì),但對白蛋白的沉淀能力比球蛋白強,加適量硫酸鈉后,沉淀白、球蛋白的能力趨于一致,與標(biāo)準(zhǔn)蛋白濁度對比進行定量測定。

              2、試劑

              磺基水楊酸~硫酸鈉試劑(SS~S)

              磺基水楊酸3.0g

              無水硫酸鈉7.0g

              蒸餾水加至100ml

              過濾后,儲存于棕色瓶中,如顯色或混濁則不能用。

              3、方法

              (1)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線含蛋白200、400、800、1200、1600mg/L的稀釋混合人血清標(biāo)準(zhǔn)系列各0.5ml,加SS~S試劑4.5ml,充分混勻,7~15分鐘后,用420nm波長比濁,以吸光度為縱坐標(biāo),蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

              (2)樣品檢測取待測腦脊液標(biāo)本各0.5ml于兩只試管中,其中一只試

              管加SS~S試劑4.5ml,另一試管加154mmol/L的NaCl溶液4.5ml作為標(biāo)本空白管。在與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的條件下比濁,所得得吸光度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得蛋白質(zhì)濃度。

              4、注意事項

              (1)腦脊液如有多量細(xì)胞或混濁,應(yīng)先離心以除去。如蛋白質(zhì)濃度過高,應(yīng)先行用生理鹽水稀釋后重新測定。

              (2)加入SS~S試劑的操作手法和速度、室溫及比濁前的放置時間都會影響實驗結(jié)果。故操作時應(yīng)注意控制加入試劑的方式和比濁時間與標(biāo)準(zhǔn)管一致。應(yīng)隨氣溫改變,勤作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

              5、正常參考值

              腰穿CSF蛋白含量:0.2~0.4g/L池穿CSF蛋白含量:0.1~0.25g/L

              側(cè)腦室穿刺CSF蛋白含量:0.05~0.15g/L

              腦脊液蛋白質(zhì)含量與年齡成正比,兒童含量較低,成人稍高,老年人又比成年人高。

              6、臨床意義

              腦脊液蛋白質(zhì)含量增高,為血腦屏障被破壞的標(biāo)志。頗受臨床工作者的重視。

              蛋白質(zhì)含量增高常見于下列情況:

              (1)中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥。腦部感染時,腦膜和脈絡(luò)叢毛細(xì)血管通透性增加,蛋白質(zhì)分子容易透過,首先是白蛋白增高,隨后是球蛋白和纖維蛋白增高。

              (2)神經(jīng)根病變。如急性感染性多發(fā)性神經(jīng)炎(Guillain~Barre綜合征),多數(shù)病例有蛋白質(zhì)增高,而細(xì)胞數(shù)正常或接近正常,即蛋白~細(xì)胞分離現(xiàn)象。

              (3)椎管內(nèi)梗阻。腦與蛛網(wǎng)膜下腔互不相通,血漿蛋白由脊髓中的靜脈滲出,CSF蛋白質(zhì)含量顯著增高,有時高達(dá)30~50g/L,這時CSF變黃,可自行凝固。如脊髓腫瘤、轉(zhuǎn)移癌、粘連性蛛網(wǎng)膜炎等。此外,早產(chǎn)兒CSF蛋白含量可達(dá)2g/L,新生兒為0.8~1.0g/L,出生兩個月后逐漸降至正常水平。

              含血的CSF蛋白質(zhì)含量增高。為了鑒別原來有無蛋白質(zhì)增高,可用每升紅細(xì)胞700×106個約相當(dāng)增加蛋白質(zhì)量0.01g/L來推算,用含血CSF的蛋白質(zhì)含量減去含紅細(xì)胞數(shù)折算成的蛋白質(zhì)含量,即為原來CSF的蛋白質(zhì)含量。

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