病毒感染后通常誘發(fā)針對病毒一種或多種抗原免疫應(yīng)答,特異性抗體效價升高或lgM抗體出現(xiàn)有輔助臨床診斷的價值。
(一)補體結(jié)合試驗(CF) CF分二個階段:1.抗原與抗體(一個為已知,一個為待檢)混合,加入定量補體,若抗原與抗體相對應(yīng),則補體被消耗;2.在上述混合物中加入溶血素致敏的綿羊紅細胞,若補本已與抗原抗體復(fù)合物完全結(jié)合,沒有剩補體存在,那么綿羊紅細胞不會溶血,結(jié)果為陽性,說明待檢標(biāo)本中有特異性存在,出現(xiàn)陽性結(jié)果時血清標(biāo)本最高稀釋度為抗體的效價。反之為陰性結(jié)果。由于補體結(jié)合抗體產(chǎn)生早,消失快,適于診斷病毒近期感染。(表23-5)。
取血時期 | 血清稀釋倍數(shù)及試驗結(jié)果 | 抗體效價 | ||||||
1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 | 1:64 | 1:128 | ||
發(fā)病2~3內(nèi)血清 發(fā)病2~3周后血清 |
+ + |
+ + |
+ + |
- + |
- + |
- - |
- - |
1:8 1:32* |
*此例的抗體效價升高4倍,有診斷意義。
(二)中和試驗(NT)在活體或活細胞內(nèi)測定病毒被特異性抗體中和、而失去致病力的試驗。試驗時:①須先測出病毒的半數(shù)致死量(LD50)或半數(shù)感染量(ID50);②隨即取活病毒與被試血清按不同比例混合,放置1~2小時讓其充分中和;③將病毒與血清混合液注入各組動物、雞胚或組織細胞培養(yǎng)管內(nèi)培養(yǎng);④根據(jù)動物、雞胚死亡數(shù)或細胞病變的管數(shù),計算出百分比(%),然后再計算這些試驗對象中的半數(shù)免于死亡或免于致病所需要的最少量血清(或最大量的病毒),就是該血清的中和抗體效價(稱為50%終點的中和效價)。診斷病毒性疾病時,須取病人雙份血清同時做對比試驗,病后血清的中和抗體效價也必須超過病初血清4倍以上,才能確診(表23-6)。用此法鑒定病毒時,須將病毒分別與免疫血清及血清正常血清(對照)混合做對比試驗,免疫血清比正常血清多中和50~100倍劑量的病毒,才能斷定是該病毒。、
表23-6 病人雙份血清的病毒中和試驗結(jié)果(組織細胞培養(yǎng)的中和試驗)
試驗病毒(用100個TCLD50)① | 病人血清(取血時期) | 活病毒+稀釋血清對細胞致、 | 50%終點血清中和抗體效價③ (血清稀釋倍數(shù)) | |||||
1:5 | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | |||
甲病毒 | 病初(2日) | 0000 | 00++ | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ | 10(1:10) |
病后(20日) | 0000 | 0000 | 0000 | 0000 | 00++ | ++++ | 80(1:80 |
說明:①TCID50=組織培養(yǎng)半數(shù)感染劑量。
、诿糠N稀釋度接種4支組織細胞培養(yǎng)管;0=未出現(xiàn)細胞致病作用;+=出現(xiàn)細胞致病作用。
、鄞死牟『笱逯泻涂贵w效價比病初血清增高8倍,有診斷意義。
病毒中和抗體的特異性高,持續(xù)時間久,以往受顯性或隱性感染后,血中可長期存在中和抗體,所以適用于流行病學(xué)調(diào)查或人群免疫水平研究,但因試驗方法繁雜,耗用動物、雞胚或細胞培養(yǎng)較多,故一般不作常規(guī)使用。
(三)血凝抑制試驗(Hemagglutinationinhibition test,HIT)某些病毒(流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、腦炎病毒等)能凝集紅細胞,而抗體與這些病毒結(jié)合后卻能阻止它們的凝集,若雙份血清有≥4倍以上滴度增高,也可用于診斷這類病毒感染。本法簡便、快速、經(jīng)濟、特異性高,常用于流行病學(xué)調(diào)查等。
(四)lgM捕捉ELISA 特異性lgM出現(xiàn)于病毒感染的早期或病毒感染的活動期,因此可從急性期病人單份血清中檢出特異性lgM,這是病毒感染實驗室早期診斷的可靠方法。實驗中先用u鏈血清包被微培板孔,用以捕捉血清標(biāo)本中的lgM類抗體,再加入特異性病毒抗原及酶標(biāo)抗體以證實特異性lgM的存在,F(xiàn)已廣泛用于病毒病的早期診斷。在先天性感染中,lgM檢測有特殊意義,因lgM不能通過胎盤,新生兒血清中發(fā)現(xiàn)抗病毒lgM提示為宮內(nèi)感染。
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