單價特異性是指血清只與其特異性抗原發(fā)生反應(yīng)。有時免疫原不純，含有微量的雜抗原(性質(zhì)相近的)，制得的抗血清中出現(xiàn)2～3種雜抗體。即使用純抗原，例如用高度純化的IgG免疫動物，出現(xiàn)的抗體總是有抗γ重鏈的抗體，也有抗κ輕鏈和抗λ輕鏈的抗體。還有一種情況，有些蛋白質(zhì)和其他蛋白質(zhì)處于一種結(jié)合狀態(tài)，如甲胎蛋白常和白蛋白相結(jié)合，因此免疫得到的抗血清總是有抗白蛋白雜抗體存在。

　　一、除去雜抗體有兩種方法：

　　1.親和層析法將交叉雜抗原交聯(lián)到瓊脂糖珠4B上，如除去抗白蛋白抗體，則交聯(lián)上白蛋白或不含甲胎蛋白的血清，裝柱后，將預(yù)吸收的抗體通過親和層析柱，雜抗體吸附在柱上，流出液則是單價特異性抗體。

　　2.吸附劑方法用不含特異性抗原的抗原液，即不含用于免疫動物抗原的其他雜抗原液，如血清、組織液或已知的某種雜抗原，用雙功能試劑將其交聯(lián)，做成固相吸附劑。如用不含甲胎蛋白的血清，稀釋1倍后，加入0.25%的戊二醛或丙酮醛，放冰箱一夜后，該血清成為膠凍狀，用力打碎(或用組織粉碎器)，用緩沖液多次洗滌后，則成為顆粒狀的凝膠吸附劑。用這種吸附劑直接加到抗血清中(約1/10)，抗原則與雜抗體結(jié)合，上清液則為無雜抗體的單價特異性抗體。有時因雜抗體太多，必須處理吸收兩次才能完全去除。吸附過的凝膠，用3mol/L硫氰酸鉀(或鈉)洗滌，洗脫掉雜抗體，可再繼續(xù)使用。

　　有時雜抗原較少，其他蛋白也少，加入戊二醛后不形成膠凍狀，此時可加入無關(guān)蛋白進行交聯(lián)，如牛血清蛋白、兔血清、馬血清、卵白蛋白等。加入量以達到含總蛋白的2%～3%為宜。

　　二、特異性IgG抗體的制備

　　在標記的免疫測定或其他技術(shù)中將特異性抗體純化出來，是極為重要的。例如在ELISA，用于包被的抗體一定要用特異性IgG，才能得到良好的效果。這是因為全血清中有大量非抗體蛋白，如白蛋白、α1和α2球蛋白等，如不除去，會干擾包被。再如反相間接血凝，致敏紅細胞的抗體也需用特異性IgG的I(ab')2才能使實驗滿意。特異性IgG和F(ab')2的制備方法有如下幾種。

　　(一)粗提法提取球蛋白

　　大多用硫酸銨鹽析法或硫酸鈉鹽析法。硫酸銨鹽析須經(jīng)過多次沉淀，第一次用40%飽和度，第二次用35%飽和度，第三次用33%飽和度，經(jīng)三次提取后的γ球蛋白基本是IgG成分。硫酸鈉法更簡便，用20%即可將γ球蛋白沉淀出來。經(jīng)鹽析后的γ球蛋白雖大多屬于IgG，但還有5%其他區(qū)帶蛋白，如γ區(qū)的雜蛋白。又因IgG組分中還含其他所謂正常的IgG，產(chǎn)生干擾。因此鹽析法粗提的γ球蛋白只能用于一般的實驗，或者是抗體效價較高的抗血清。

　　(二)離子交換層析法提取IgG

　　常用的離子交換劑有DEAE纖維素或QAE纖維素，以QAE-Sephadex最為理想，DE22、32、52也可應(yīng)用。取QAE-SephadexA25或A50經(jīng)酸處理并在0.05mol/LpH7.5～8.6的磷酸鹽緩沖液中平衡，將水分抽干，稱濕重Ig加于10ml血清中，在室溫30min后，離心或過濾除去離子交換劑。上清液再如此處理一次，即獲得較純的IgG，甚至不含其他雜蛋白。用該技術(shù)純化IgG簡便，不損壞抗體，既可小量提取，也可大量制備。

　　(三)親和層析法提取特異性IgG

　　將純化抗原或粗制抗原(如是單價特異性則對抗原要求不高)交聯(lián)Sepharose4B制成親和層析柱，將抗血清過柱后洗去未結(jié)合的雜蛋白，再用硫氰酸鉀洗脫，流出的是純的特異性IgG抗體。因硫氰酸鉀對抗體有破壞作用，應(yīng)及時透析除去。純化的IgG因含量低，失去保護作用，應(yīng)及時應(yīng)用或凍干保存，亦可20℃保存，但皆不理想;加入三乙醇胺或甘油可起保護作用。

　　(四)酶解法制備F(ab')2片段

　　胃蛋白酶對IgG的作用點是在連接兩重鏈的二硫鍵靠C端處(232氨基酸處)，結(jié)果兩個Fab由二硫鍵連接，保留了抗體的結(jié)合點。與IgG相比，F(xiàn)(ab')2的特點是去掉了Fc段，這樣在細胞免疫實驗中免除了受體作用;同時也使IgG失去主要的抗原特性，不被抗IgG抗體結(jié)合;在反向間接血凝中，用F(ab')2致敏羊紅細胞比用IgG效果好。