初級檢驗技士考試輔導(dǎo):瑞氏染色法

　　瑞氏染色法是臨床上最常用的染色方法。

　　1.瑞氏染料

　　由酸性染料伊紅(E-)和堿性染料亞甲藍(M+)組成。伊紅通常為鈉鹽，有色部分為陰離子。亞甲藍(又名美藍)為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽，即氯化美藍，有色部分為陽離子。美藍容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料(即天青)。將適量伊紅、美藍溶解在甲醇中，即為瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美藍和伊紅;二是固定細(xì)胞形態(tài)。

　　2.染色原理

　　既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用。各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣。如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì);細(xì)胞核蛋白、淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞胞質(zhì)為酸性，與堿性染料美藍或天青結(jié)合，染紫藍色或藍色，稱為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結(jié)合，染淡紫紅色，稱為嗜中性物質(zhì)、原始紅細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞胞質(zhì)、核仁含較多酸性物質(zhì)，染成較濃厚的藍色;中幼紅細(xì)胞既含酸性物質(zhì)，又含堿性物質(zhì)，染成紅藍色或灰紅色;完全成熟紅細(xì)胞，酸性物質(zhì)徹底消失后，染成粉紅色。

　　3.pH的影響 (pH6.4～pH6.8) 

　　細(xì)胞各種成分均屬蛋白質(zhì)，因蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液pH而定，在偏酸性環(huán)境中正電荷增多，易與伊紅結(jié)合，紅細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞染色偏紅，細(xì)胞核呈淡藍色或不染色;在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與美藍結(jié)合，所有細(xì)胞呈灰藍色，顆粒呈深暗，嗜酸性顆粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性顆粒偏粗，呈紫黑色。稀釋染液必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致細(xì)胞染色呈色異常，形態(tài)難以識別，甚至錯誤。

　　4.染色方法和注意事項 

　　(1)血涂片干透后固定，否則細(xì)胞在染色過程中容易脫落。

　　(2)沖洗時應(yīng)以流水沖洗，不能先倒掉染液，以防染料沉著在血涂片上。沖洗時間不能過久，以防脫色。如血涂片上有染料顆粒沉積，可滴加甲醇，然后立即用流水沖洗。

　　(3)染色過淡可以復(fù)染，復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液，然后加染液。染色過深可用流水沖洗或浸泡，也可用甲醇脫色。

　　(4)瑞氏染色Ⅰ液由瑞氏染料、甲醇(AR級以上)和甘油組成，Ⅱ液為磷酸鹽緩沖液(pH6.4～pH6.8)。