常用鹽水凝集法檢測(cè)紅細(xì)胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據(jù)抗原抗體存在的情況判定血型。常規(guī)的方法有：①正向定型：用已知抗體的標(biāo)準(zhǔn)血清檢查紅細(xì)胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢查血清中未知的抗體。結(jié)果判定：凡紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集者為陽(yáng)性，呈散在游離狀態(tài)為陰性。ABO血型定型原則見(jiàn)表1-5-2。

　　2.鑒定方法

　　（1）生理鹽水凝集法：①玻片法：操作簡(jiǎn)單，適于大量標(biāo)本檢查，但反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)；被檢查者如血清抗體效價(jià)低，則不易引起紅細(xì)胞凝集，因此，不適于反向定型。②試管法：由于離心作用可加速凝集反應(yīng)，故反應(yīng)時(shí)間短，而且，借助于離心力可以使紅細(xì)胞接觸緊密，促進(jìn)凝集作用，適于急診檢查。

　　紅細(xì)胞亞型抗原性弱，如抗A抗B標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)低時(shí)，易造成漏檢或誤定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此類(lèi)錯(cuò)誤。

　　玻片法凝集結(jié)果判斷：紅細(xì)胞呈均勻分布，無(wú)凝集顆粒，鏡下紅細(xì)胞分散。在低倍鏡下凝集程度強(qiáng)弱判斷標(biāo)準(zhǔn)：①呈一片或幾片凝塊，僅有少數(shù)單個(gè)游離紅細(xì)胞為（++++）。②呈數(shù)個(gè)大顆粒狀凝塊，有少數(shù)單個(gè)游離紅細(xì)胞為（+++）。③數(shù)個(gè)小凝集顆粒和一部分微細(xì)凝集顆粒，游離紅細(xì)胞約占1／2為（++）。④肉眼可見(jiàn)無(wú)數(shù)細(xì)沙狀小凝集顆粒。于鏡下觀察，每凝集團(tuán)中有5～8個(gè)以上紅細(xì)胞凝集為（+）。⑤可見(jiàn)數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周?chē)�有很多的游離紅細(xì)胞（±）。⑥可見(jiàn)極少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見(jiàn)細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布為（-）。

　�。�2）凝膠微柱法：是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠微柱介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)的免疫學(xué)方法。血型抗體為單克隆抗體，加入試劑、標(biāo)本，用專(zhuān)用離心機(jī)離心后可直接用肉眼觀察結(jié)果或用血型儀分析。此法操作標(biāo)準(zhǔn)化，定量加樣，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。

　　3.抗A、抗B和抗AB標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)

　　準(zhǔn)血清均采自健康人，并應(yīng)符合下述條件：①特異性：只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集，無(wú)非特異性凝集。②效價(jià)：我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清效價(jià)均在1：128以上。③親和力：我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)要求抗A對(duì)A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開(kāi)始出現(xiàn)凝集的時(shí)間分別是15s、30s和45s；抗B對(duì)B型紅細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)凝集的時(shí)間為15s。凝集強(qiáng)度為3min時(shí)，凝塊不小于1mm2。④冷凝集素效價(jià)：在1：4以下。⑤無(wú)菌。⑥滅活補(bǔ)體。

　　4.血型鑒定操作時(shí)注意事項(xiàng)

　　一般注意事項(xiàng)：①所用器材必須干燥清潔、防止溶血，凝集和溶血的意義一樣。為避免交叉污染，建議使用一次性器材。標(biāo)準(zhǔn)血清從冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后再用，用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。②加試劑順序：一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便核實(shí)是否漏加血清。③雖然IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃最強(qiáng)，收集整理但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般在室溫20℃～24℃內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，而37℃條件，可使反應(yīng)減弱。④幼兒紅細(xì)胞抗原未發(fā)育完全、老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型。⑤玻片法反應(yīng)時(shí)間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。⑥正、反定型結(jié)果一致才可發(fā)報(bào)告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，長(zhǎng)期大量應(yīng)用免疫抑制，血型抗體可減弱或消失；血清中存在自身免疫性抗體、冷凝集素效價(jià)增高、多發(fā)性骨髓瘤、免疫球蛋白異常均可造成反定型困難；新生兒體內(nèi)可存在母親輸送的血型抗體，且自身血型抗體效價(jià)又低，因而出生6個(gè)月以?xún)?nèi)的嬰兒不宜做反定型。老年人血清中抗體水平大幅度下降或被檢者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗體，可引起假陰性或血型鑒定錯(cuò)誤。